1、參觀者請保持安靜肅穆，不得嬉鬧喧嘩；愛護歷史文物，不得褻瀆、損毀國傢公祭設施；衣著端莊得體，不得身著、佩戴與設施環境、氛圍不符的服飾、圖標；服從組織引導，不得擾亂公共秩序。
2、為保持莊嚴肅穆、環境整潔，館區禁止擅自擺攤設點，進行銷售、遊藝、表演、乞討以及實施其他有損場館環境與氛圍、違反公序良俗的行為。
3、禁止攜帶易燃、易爆、有毒和有放射性、腐蝕性以及其他可能危及人身、財產安全的危險物品進入館區。
4、在館區進行展覽、演出、影視劇拍攝、網絡直播、采訪等活動的，應當征得紀念館同意。
5、禁止任何單位和個人歪曲、否認南京大屠殺史實，侮辱、誹謗南京大屠殺死難者、幸存者，編造、傳播含有上述內容的有損國傢和民族尊嚴、傷害人民感情的言論或者信息，侵害南京大屠殺死難者、幸存者的姓名、肖像、名譽等合法權益。
6、館區禁止使用具有日本軍國主義象征意義的軍服、旗幟、圖標或者相關道具，拍照、錄制視頻或者通過網絡對上述行為公開傳播。
7、凡違反上述規定者，本館有權予以勸阻和制止。情節嚴重者報送公安機關依法處理。
