1、母種培養：1、麥芽糖酵母瓊脂培養基（MYA）大豆蛋白腖（豆腖）1克、酵母2克、麥芽糖20克、瓊脂20克，加水至1000毫升。2、馬鈴薯葡萄糖酵母瓊脂培養基（PDYA）馬鈴薯300克（加水1500毫升，煮20分鐘，用濾汁）、酵母2克、豆腖1克、葡萄糖10克、瓊脂20克，加水至1000毫升。3、燕麥粉麥芽糖酵母瓊脂培養基（DMYA）燕麥粉80克、麥芽糖10克、酵母2克、瓊脂20克，加水至1000毫升。
2、原種和栽培種培養基：1、小麥稈或裸麥稈，切碎（長2—3厘米），泡濕，裝瓶，高壓滅菌後備用。2、小麥、裸麥，高粱、玉米、小米等谷粒浸泡，煮透至沒有白芯但表皮不破，加2%碳酸鈣，裝瓶，高壓滅菌後備用。3、木屑和小木片各40%、麩皮20%，制作栽培種培養基。
3、接種：可以用培養3—4天的液體菌種接種。若用固體菌種必須加大接種量（菌種/培養料），接種量最少10%，最好15%—20%。
4、培養：接種後，把菌種瓶或袋放在20—28℃培養室中培養。大球蓋菇菌絲生長幾天後，菌絲生長速度會逐漸緩慢，加速菌絲生長的方法是攪拌。用液體菌種接種的無菌麥粒培養基，每隔3—7天搖瓶一次，把菌絲搖斷，可以刺激菌絲再生，能保證菌絲生長旺盛。
大球蓋菇母菌種制作方法比較復雜，一般來說在傢裡制作的話有點困難，朋友們也可以在市場購買成品回來食用。
