1、首次培養紅休菌菌種需購買。 菌液和菌膜（菌液上面漂浮的一層像海蜇一樣的膜）都可以作為菌種，最好是二者同時作菌種。菌液與培養液按1:4的比例在培養容器中混合均勻，菌膜用量不少於容器截面積的一半。然後用幹凈紗佈或手帕蓋住容器口，紮緊，這樣既能防塵土、防止果蠅鉆入產卵孵蛆，還可以保證通氣，有利於菌膜形成。接種完畢，放在無陽光直射的地方，在28℃左右的溫度下靜止培養，不要動它。傢庭培養紅茶菌，隨季節的變化，必須采取相應的措施，使溫度維持在25～32℃之間，不可過高或過低，這樣才能使紅茶菌在10天成熟。
2、當菌膜呈乳白色，菌液不冒氣泡，澄清透明，顏色比原來的茶水淺，酸味濃，說明已發酵成熟。也可用PH值試紙測定其PH值，如果已達到3.0以下則表示已成熟。已發酵成熟的紅茶菌，將其菌液小心地由培養容器傾入保存菌液的容器中，註意不要使底部淡褐色的沉淀物隨菌液流出。此菌液在室溫下可保存2個月或更長時間，可以陸續飲用。如放置時間較長，菌液表層重新長出薄薄的菌膜，並不影響質量。
3、菌液頃出後，把手洗凈或用消毒後的鑷子把菌膜取出，摘除菌膜上面變褐的部分，再用涼開水沖洗菌膜數遍。把容器底部沉淀物倒掉，容器用涼開水洗幹凈，倒入菌液、培養液及處理好的菌膜，又可按上述方法繼續培養紅茶菌。
