1、準備溫開水870毫升、酸奶菌粉1克、奶粉130克。現將杯子放入開水中煮5分鐘消毒，晾幹待用，將全脂奶粉倒入溫水杯中，再把酸奶菌粉倒入杯中，均勻攪拌。玻璃瓶等消毒滅菌。玻璃瓶在滅菌器內滅菌半小時，如用蒸鍋滅菌需45分鐘，接種室內需紫外線滅菌50分鐘，接種工具在高壓蒸汽滅菌器內滅菌30分鐘。
2、牛奶滅菌。把鮮牛奶裝入加熱罐，並加入10～12%的白糖，在85～90℃下滅菌30分鐘或用其它方法滅菌。無論采用哪種方法以不破壞牛奶原有營養成分為佳，滅菌後冷卻。在滅菌前或滅菌過程中最好除去上層油脂，使牛奶脫脂。
3、接種。把溫度低於43℃的滅菌牛奶分裝於滅好菌的玻璃瓶中，按牛奶2%～4%的接種量在接種室內接種並攪拌均勻，註意罐裝要滿，不留空隙，接好後立即封口，以保證乳酸發酵的厭氧條件。用溫水(低於43℃)浸泡8小時~10小時後再送入0～5℃的冷藏室內進行冷藏後，即可上市銷售。經後熟酸乳因含酯類，具有特殊的芳香氣味。冷藏的作用一方面可防止酸度增加，防止雜菌污染，另一方面可使質地結實，乳清回收，從而使酸乳質量的穩定性大為提高。在整個過程中要註意無菌操作，工作人員要穿無菌工作服，戴無菌手套、口罩，手要清洗幹凈，不可不戴口罩就接種以防雜菌污染。
4、質量標準。優質酸乳外觀呈乳白色或稍帶黃色，表面光滑，凝乳結實，組織細膩，質地均勻，允許有少量乳清析出，無氣泡，酸甜適度，不得有辛辣味及其它異味。如果酸乳中有氣泡或瓶蓋上鼓或有辛辣味及其它異味，說明鮮乳在發酵過程中已被雜菌污染不能食用。如生產種(發酵劑)出現以上情況，堅決不能用於生產，以防造成不必要的損失。如在適溫下超時，乳凝很少、乳清分離，甚至不乳凝，出現大量懸浮物並出現臭味，說明菌種衰退嚴重或菌種已被雜菌污染，應停止使用。如菌種衰退，可把衰退的菌種在斜面培養基上培養，進行提純復壯，再進行繁殖，即可得到優良的生產種。
